全视野闪光视网膜电图（Electroretinogram，ERG）作为一项客观评价视网膜功能的手段，已经在实验室和临床应用一百多年的历史。无论是在实验室或临床上，对 ERG 的研究始终没有停止，ERG 也一直是研究动物和人类视网膜功能的重要工具之一。由于鼠类和灵长类动物眼之间有极强的相似性，并且大鼠相对猴子价格便宜得多，因此大鼠也成为研究各类眼病的常用模型。明视 ERG 是在明适应状态下，使用一定的强闪光刺激，从角膜表面记录到的视网膜综合电反应。该综合电反应波由 a 波、b 波及最新发现的明视负波反应（Photopic negative response，PhNR）等组成。其中 a 波和 b 波是研究比较成熟的波形，分别反映光感受器层和双极细胞层的功能，而对 PhNR 的研究尚较少。根据 Viswanathan 等^[1-3]的研究表明，PhNR 反映的是视网膜神经节细胞及其轴突的功能，是最近视觉电生理领域研究的热点。本研究对正常成年 SD 大鼠明视 ERG 进行了研究和分析，以探讨正常成年 SD 大鼠的 PhNR 特征。

材料与方法

一、实验动物

正常成年 SD 大鼠 60 只（购自汕头大学医学院动物中心），周龄 9～12 周，平均（10.7 ± 0.8）周；体重 280～320 g，平均（301.7 ± 10.2）g。60 只 SD 大鼠中雌性 29 只，雄性 31 只。

二、实验仪器及刺激参数

采用罗兰视觉电生理仪（ROLAND，Consult，德国）记录明视 ERG，刺激器为小型 Ganzfeld 刺激器（ROLAND，Consult，德国），见图 1。角膜电极和皮肤电极见图 2。闪光强度 3.0 cd·s/m²，背景光强度 25 cd·s/m²。低频截止（low cut-off）0.2 Hz，高频截止（high cut-off）300 Hz，每项记录重复 30 次。

图1 小型Ganzfeld刺激器

图2 角膜电极和皮肤电极

表1 60 只 SD 大鼠明视 ERG 隐含期及振幅统计结果

三、实验方法

检查前大鼠用戊巴比妥钠按 50 mg/kg 腹腔注射麻醉，托品卡胺滴眼液充分散瞳，爱尔卡因滴眼液表面麻醉。在室内照明下明适应 10 min，明适应的同时安放电极。作用电极为角膜电极（图 2 上），置于角膜。参考电极和地电极均使用皮肤电极（图 2 下），分别置于前额及耳尖皮下。明适应时间足够后将大鼠平躺，把小型 Ganzfeld 全视野刺激器罩在大鼠头部。然后按照 ISCEV 标准记录大鼠右眼明视闪光全视野 ERG。

四、评价标准

a 波、b 波的标识依据是国际视觉电生理协会（Clinical Electrophysiology of Vision，ISCEV）的最新标准，a 波的隐含期为从刺激开始（图中的 N 点）到第一个波谷的时间，b 波的隐含期为从 N 点到第一个波峰的时间，a 波的振幅为从基线到 a 波波谷的高度，b 波的振幅计算为从 a 波波谷到 b 波波峰的高度^[4]。由于 PhNR 不包括在 ISCEV 标准中，标识的依据是 PhNR 的发现者 Viswanathan 等^[1-3]的标准，即从 N 点到 b 波后的第一个波谷的时间为 PhNR 的隐含期，基线到波谷的高度为其振幅。

五、统计学处理

数据采用 SPSS 15.0 统计软件处理。正态分布采用 Shapiro-Wilk 检验，雄性和雌性 SD 大鼠各项明视 ERG 反应波之间的差异使用独立样本 T 检验。

结果

每只 SD 大鼠均能记录到稳定的 a 波、b 波和 PhNR，见图 3。a 波的隐含期和 PhNR 的隐含期及振幅均符合正态分布，而其余指标均不符合正态分布，见表 1。明视 ERG 各反应波隐含期及振幅的频数分布直方图和均数箱图见图 3－4。在 6 项观察指标中，PhNR 隐含期为（124.6 ± 8.5）ms，其变异系数最小（0.07），b 波隐含期次之（0.12），而 a 波振幅的变异系数最大（0.8）。PhNR 的振幅为（11.3 ± 4.2）μV，变异系数为 0.37。雄性和雌性 SD 大鼠明视 ERG 的各反应波比较差异无统计学意义（P ＞ 0.05）。图中可以看到明确的 a 波、b 波及 PhNR。

图3 1 只 SD 大鼠的 ERG 结果

图4 明视 ERG 各反应波隐含期及振幅的频数分布直方图

图5 明视 ERG 各反应波隐含期及振幅的均数箱图

讨论

明视 ERG 是在明适应状态下，使用一定的强闪光刺激，从角膜表面记录到的视网膜综合电反应。该综合电反应包括 a 波、b 波和紧跟 b 波之后的负向波 PhNR。根据动物模型及药理实验研究证实，PhNR 来源于视网膜神经节细胞及其轴突的电活动^[1-2]。因此 PhNR 最初用于青光眼的实验室及临床研究^[2-3,5]。研究发现，在青光眼动物模型及病人，PhNR 选择性受损，而 a 波和 b 波无明显改变。在随后的视神经病变研究中也发现了类似的结果^[6-7]。在视网膜中央动脉阻塞病人，PhNR 降低至未受累眼的 12.3％，而视锥反应 b 波仅降低至未受累眼的 73.4％。笔者也曾经对视网膜静脉阻塞病人^[8]和非增殖糖尿病视网膜病变病人的 PhNR 进行了研究，发现 PhNR 可以作为评价内层视网膜功能的敏感指标^[9]。PhNR 越来越受到眼科研究者的重视，并被应用于视网膜视神经相关疾病的实验室研究中。在实验动物中，由于鼠类和灵长类动物眼之间有极强的相似性，且大鼠价格比猴子更便宜，因此大鼠也成为研究各类眼病的常用模型。

关于大鼠 PhNR 的研究尚不多，Li 等^[10]就对 Brown Norway 大鼠的 PhNR 进行了一些研究，他们发现，在 40 cd/m² 的绿色背景光强度下，随着闪光强度从 0.36 增强到 45.52 cd·s/m²，PhNR 和 b 波的振幅也随着增大，并且在刺激光强度为 0.71 cd·s/m² 时，开始出现稳定的 PhNR。但是 PhNR 的振幅在刺激光强度为 11.38 和 22.76 cd·s/m² 时饱和，而 b 波的振幅则持续增加。他们使用 11.38 和 22.76 cd·s/m² 刺激光记录到的正常 Brown Norway 大鼠的 PhNR 振幅分别为（46 ± 1.3）μV 和（50 ± 1.3）μV。本研究设计参考 ISCEV 标准采用标准的白色刺激光（3.0 cd·s/m²）和白色背景光（25 cd/m²），记录到稳定的 a 波、b 波和 PhNR。其中 a 波的隐含期和 PhNR 的隐含期及振幅均符合正态分布，而其余指标均不符合正态分布。在 6 项观察指标中，PhNR 隐含期为（124.6 ± 8.5）ms，其变异系数最小（0.07），b 波隐含期次之（0.12），而 a 波振幅的变异系数最大（0.8）。PhNR 的振幅为（11.3 ± 4.2）μV，变异系数为 0.37。

本研究 PhNR 振幅的测量方法是参照 PhNR 的发现者 Viswanathan 等^[1-3]的标准，即从基线到波谷的高度，但也有研究者选用波峰到波谷的测量方法，即从 b 波波峰到 PhNR 波谷的高度^[11]。笔者认为还是前者比较合理。

本研究结果显示，正常 SD 大鼠 PhNR 隐含期和振幅是比较稳定的指标。本研究的结果为我们今后进一步研究 SD 大鼠各种视网膜视神经疾病模型的 PhNR 提供了宝贵的资料。在进一步研究中，笔者将把 PhNR 用于 SD 大鼠青光眼模型及神经切断模型等的研究。